API 20E 生化鉴定条在致病菌检验中的应用

2018-07-20

1、
样品、材料和检测依据


1.1
样品来源

哈尔滨历年检测出的阳性菌株13 株（4 株致病性大肠埃希氏菌、7 株志贺氏菌、2 株甲型副伤寒菌。


1.2
材料

API 20E 生化反应试剂条（法国生物梅里埃公司生产），批号：1002230950；API-Plus 鉴定软件；国产细菌生化鉴定管，批号：20140218；志贺氏菌属诊断血清22 种，批号：20140201；肠道致病性大肠埃希氏菌诊断学清15 种，批号：20140201；沙门氏菌属诊断血清30种，批号：20140201。


1.3
检验依据

沙门氏菌检验方法：GB/T4789.4-2010、志贺氏菌检验方法：GB/T4789.5-2012、致泻性大肠埃希氏菌

检验方法：GB/T4789.6-2003。API20E 生化反应试剂条和国产细菌生化鉴定管按厂家操作说明书进行操作。


1.4
检验步骤

将13 株阳性菌株进行分离纯培养后，

（1）用0.85% 生理盐水制备菌悬液备用，按操作说明书分别加入API20E生化反应试剂条内，37 ℃培养24±2h；

（2）滴加附加试剂，判断各生化管的反应结果并转换成相关读数；

（3）API-Plus 软件分析得出最终结果；

（4）同时挑取分离后的的纯菌接种于国产生化鉴定管GYZ -15e 进行比对试验培养18-24h 后观察生化反应结果查革兰氏阴性杆菌新编码检索表验证，同时进行血清学凝集实验进行验证。

2、
实验结果


2.1
API 20E 生化反应试剂条对13株阳性菌种鉴定结果


2.1.1：4 株大肠埃希氏菌具体检验结果

API LAB-Plus软件分析结果： 大肠埃希氏菌2，%id=95.0 T=0.81 好的鉴定



2.1.2：7 株志贺氏菌具体检验结果


API LAB-Plus 软件分析结果：%id=92.4 T=0.90: 很好的鉴定

2.1.3：2 株甲型副伤寒沙门氏菌具体检验结果

API LAB-Plus 软件分析结果：%id=99.2 T=1.00 很好的鉴定

2.2
国产细菌生化鉴定管GYZ-15e 具体检验结果


2.2.1：4 株大肠埃希氏菌结果：革兰氏阴性杆菌新编码鉴定手册编码为3044502，大肠杆菌2，好的鉴定。


2.2.2：7 株志贺氏菌检验结果：革兰氏阴性杆菌新编码鉴定手册编码为0004140，志贺氏菌，好的鉴定。


2.2.3：2 株甲型副伤寒沙门氏菌检验结果：革兰氏阴性杆菌新编码鉴定手册编码为0104552，甲型副伤寒沙门氏菌，很好的鉴定。


3：API 20E 生化反应试剂条与国产细菌生化鉴定管G Y Z -15e 检验结果一致的13 株菌株的血清学凝集实验结果：


3.1：4 株大肠埃希氏菌：致病性大肠埃希氏菌OK 多价1++，O26：K60B++，盐水对照—


3.2：7 株志贺氏菌：志贺氏四种多价++，福氏多价++，群3、4+，型II+；福氏志贺氏菌2a.


3.3：2 株甲型副伤寒沙门氏菌A - F 多价+ +，H 第1 相a+，第2 相1、5++，O2 因子++，生理盐水对照—，甲型副伤寒沙门氏菌。

4、
结论


API 20E 生化反应试剂条对13 株阳性菌种检验结果与国产生化鉴定管GYZ-15e 检验结果一致，经血清学凝集实验均证实为一致。


5、
讨论


微生物检测质量水平评价的重要标准是准确性，质控菌株鉴定是验证试验方法准确性有效手段。国产生化管价格便宜、使用方法方便，深受基层检验人员的欢迎，常规的微生物分离鉴定需要准备大量的各种培养基及各种生化管等，传统的手工鉴定从增菌筛选鉴别到生化实验，期间的准备工作、洗刷、消毒及

实验工作量大，各项生化指标都要一一接种，任一环节的失误都会导致前功尽弃，而且由于生化管本身的质量问题及接种技术的原因，导致接种量不确定，结果的判定对于经验不足者更是难以适应。

API 20E 细菌数值鉴定系统，该系统是一个由生化试剂条和细菌鉴定数据库组合而成的鉴定系列，检索工具包括生化反应检索手册或ATBnew、API LAB-Plus 分析软件。

ATB new、API LAB-Plus 分析软件较生化反应检索手册更全面、详尽、能判定

很多非典型鉴定模式，而且对软件的不断升级保证了API 数据库的最新版本。在进行生化实验时，更加容易操作和控制质量，便于观察生化检验结果，鉴定结果更加简单、快速、可靠，可实现微量化、标准化、商品化。

其优势


①不需要昂贵的仪器设备，仅需要生化试剂条和一套软件，基层实验室一般都能满足要求.


②所需耗材少，API 20E 用一种试剂条就可以检验肠杆菌科和弧菌科等多种食物中毒等常见细菌


③可鉴定多种致病菌，API 20E 是肠杆菌科和其他G—杆菌和弧菌科的标准鉴定系统，它可以用一种试剂条来鉴定大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌、霍乱弧菌等不同致病菌.


④操作简单，只要纯培养出单个菌落，革兰氏染色涂片，再做氧化酶实验和触酶等简单鉴定实验，就可选用鉴定试剂条，按说明书进行菌悬液，滴加菌液37℃培养18-24h 后，观察生化反应结果，读取数据，大大提高了工作效率。该方法鉴定结果准确，可以鉴定到“种”的水平，准确率可达到100%，结果十分可靠。


6、
注意事项


① 严格掌握无菌操作技术，制备菌悬液的菌株必须使用纯种。


② 结果分析判断。API LAB - Plus 判别系统具有专家系统功能， 结果

%i d99.9 T ≥ 0.75 为极好的鉴定；

99.8 ≤ % i d ≤ 99.0 T ≥ 0.75 为很好的鉴定；

90.9 ≤ %id ≤ 98.9 T ≥ 0.25 为好的鉴定；

80.0 ≤ %id ≤ 89.9 T ≥ 0 为可接受的鉴定；

%i d <80 为低分辨率，需做评价中给出的“补充生化试验”。

1. 张殿宏, 李海英, 安艳春. API20E生化鉴定条在致病菌检验中的应用[J]. 医药前沿, 2014(30):305-306.

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